【华智产品汇】高通量+低成本+无污染：华智生物DNA提取的专利方

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【华智产品汇】高通量+低成本+无污染：华智生物DNA提取的专利方

作者：[db:作者] 时间：2021-06-04 17:25

编者按

动植物不同组织的DNA提取是开展分子遗传研究和分子育种应用的第一步。作为国内领先的生物种业行业性关键共性技术平台，华智生物拥有高通量、低成本、无污染的DNA提取专利方法和技术体系，装备有高通量组织研磨机、TECAN液体处理系统、96通道全自动核酸提取仪等仪器设备，可以实现动植物不同组织快速、高质量的DNA提取，每日提取量最高达10000份，满足大规模分子标记筛选、转基因检测等不同分子育种应用场景。今天，小编就为大家介绍华智生物DNA提取的两个专利技术，同时也欢迎大家使用华智生物的技术平台，共同推动动植物的分子育种应用。

LGC基因分型系统

的replikator

贝克曼的高速板式

离心机

高通量

组织研磨仪

专利1

一种高通量水稻叶片DNA提取的方法

叶片是DNA提取的常用组织。利用CTAB等方法提取的水稻叶片DNA可以满足KASP(即竞争性等位基因特异性PCR，Kompetitive Allele Specific PCR)基因型分型的要求，而在在高通量的基因型分型设备Array tape上也能得到较好的结果。但这种DNA提取方法耗时长，通量低，并且用到大量氯仿等有毒有机溶液，仅适用于测序或基因芯片等对于DNA质量要求高的实验，对于大规模高通量叶片DNA提取如基因鉴定，纯系材料少量标记分型等则非常不适宜。因此开发不使用有毒有机试剂的快速提取水稻叶片DNA的方法是非常必要的。

通过赫然等 “快速制备水稻基因组DNA PCR模板的煮沸法” (植物学生理学通讯，2003)，我们知道利用TE缓冲液进行沸水浴可以提取水稻叶片DNA，该DNA可以满足普通PCR实验的要求。我们希望找到一种可以进行高通量水稻叶片DNA提取的方法，并且可以满足KASP基因型分型的要求。

华智生物发明的一种高通量水稻叶片DNA提取方法，可以很好地满足高通量的KASP基因型分型的要求。本发明技术方案包括：取适量水稻叶片放入适当容器中，置于55-65℃条件下烘烤至干(一般烘烤60-90min)；研磨；然后加入DNA提取液，混匀后进行提取；将提取液离心；取适量上清液，加入19-60体积倍(优选29-59体积倍)的超纯水，混匀，即得DNA。

本发明方法的优点是不使用任何一种有机溶剂，安全无毒；同时无需用液氮进行处理，烘箱烘干叶片的操作方法对实验条件依赖度低，容易实现，且对结果没有影响；而且高度匹配移液工作站，实现高通量自动化。

本发明于2017年申请专利保护(专利申请号为201710539435.7)并于2020年8月授权。

专利2

一种水稻种子DNA快速提取方法

?相对于水稻叶片组织，因为种子含有种皮且淀粉等物质含量高，DNA提取的难度较大。利用国标法提取的水稻种子DNA可以满足KASP(即竞争性等位基因特异性PCR，Kompetitive Allele Specific PCR)基因分型的要求， LGC 384及1538体系和Array tape上均能得到较好的结果。但这种方法耗时长，通量低，种子研磨难度大，并且用到大量氯仿等有毒有机溶液，仅适用于种子真实性检验，对于大规模高通量单粒种子DNA提取如纯度鉴定，纯系材料少量标记分型等则非常不适宜。因此开发不使用有毒有机试剂的快速提取水稻单粒种子DNA的方法是非常必要的。

通过赵国珍等“一种高效便捷的水稻DNA提取法及其应用(《中国水稻科学》, 2012)”及郑秀婷文章“Non-destructive high-throughput DNA extraction and genotyping methods for cotton seeds and seedlings”，我们知道HOTSHOT法提取的水稻DNA种子，可以在一定条件下满足KASP要求(96体系可行，384和1536体系未知)。但水稻种子高通量研磨较叶片要难很多，因此我们希望得到在不需要研磨种子的前提下，能提取满足KASP要求的种子DNA的方法。

有鉴于此，华智生物发明了一种水稻种子DNA快速提取方法，该方法能从水稻种子中高效、快速、简便的提取模板DNA，满足KASP要求，不仅不需要使用氯仿等有机溶剂而且不需要研磨种子。该方法具体包括将水稻去壳种子用适量buffer A温浴后再加入适量buffer B，充分振荡均匀后离心，取适量上清液加入适量异丙醇充分振荡均匀后置于-20℃冰箱中一定时间，再离心弃上清，将沉淀物干燥，加入适量超纯水溶解；即得DNA样品。

与现有的水稻DNA 提取方法相比，本发明具有如下优点：不需要使用氯仿等有机试剂，水稻不需要研磨成粉即可提取DNA，提取的DNA可以在KASP标记0.8ul的反应体系下很好的扩增。

该发明于2017年申请专利保护(专利申请号为201710538088.6)并于2020年10月授权。